特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 假單胞菌屬通用探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Pseudomonas spp. | 貨號 | YSP97120 |
熒光染料的優(yōu)點(diǎn): 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價(jià)格便宜; 熒光染料的缺點(diǎn): 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識別,進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來說,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個(gè)能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán),3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。 正常情況下兩個(gè)基團(tuán)的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí),引物與該探針同時(shí)結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時(shí),Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn): 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn): 成本高; 設(shè)計(jì)難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術(shù)的定量原理: 擴(kuò)增曲線 在Real- qPCR中,對整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時(shí)即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺期”。在該時(shí)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì),熒光信號強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個(gè)循環(huán),收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號,這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。 一般而言,熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便,在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 睪素2(TIC2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 97% 羅伊氏乳桿菌 1g 唾液酸轉(zhuǎn)移酶4C(SIAT4C)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 97% 香菇 5g 唾液酸轉(zhuǎn)移酶9(SIAT9)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 同絲毛殼 1g 唾液酸轉(zhuǎn)移酶4B(SIAT4B)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 型溶血性鏈球菌 25g 唾液酸轉(zhuǎn)移酶4A(SIAT4A)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 茶樹菇 5g 唾液酸轉(zhuǎn)移酶1(SIAT1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ≥99% 粘質(zhì)沙雷氏菌 25MG 唾液酸轉(zhuǎn)移酶7A(SIAT7A)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 97% Okibacterium 100g 唾液酸轉(zhuǎn)移酶8(SIAT8)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 97% 馬克斯克魯維酵母 25g 唾液酸轉(zhuǎn)移酶8B(SIAT8B)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 97% 尖孢鐮刀菌 500g 唾液酸轉(zhuǎn)移酶8C(SIAT8C)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 97% Paraburkholderia sp. 5g 唾液酸轉(zhuǎn)移酶8D(SIAT8D)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 97% 葡萄白腐菌(可訂購) 1g 唾液酸轉(zhuǎn)移酶7B(SIAT7B)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 97% 雪腐微座孢 250mg 唾液酸轉(zhuǎn)移酶7C(SIAT7C)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ≥97% (HPCE) 密旋鏈霉菌 50mg 唾液酸轉(zhuǎn)移酶7D(SIAT7D)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 99% 釀酒酵母 25g 正輔因子4(PC4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 99% 松鼠葡萄球菌 5g 轉(zhuǎn)錄銜接因子1(TADA1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 97% Pseudomonas batumici 25g 轉(zhuǎn)錄銜接因子3(TADA3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 97% 少孢哈薩克斯坦酵母 5g *基鳥苷合酶1(TGS1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 玫煙色棒束孢 25g 假單胞菌屬通用探針法熒光PCR檢測試劑盒酶動力蛋白1抗體cRaf/Raf1(c-raf 1) cRaf/Raf1抗原1 Kit 酸化酶動力蛋白1抗體MEK1/MAPKK1(mitogen activad proin kinase kinase 1) MEK1/MAPKK1抗體(N-端)100 ul 腦啡肽A抗體CRF (Corticotropin-Releasing Factor) 促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子500 ul 強(qiáng)直性肌營養(yǎng)不良相關(guān)蛋白9抗體CSIG(cellular senescence inhibid gene) 細(xì)胞衰老抑制基因抗原1 Kit DYX1C1蛋白抗體Cripto-1(N-rminus) 畸胎瘤衍化生長因子抗原(表皮生長因子相關(guān)肽)N端1 Kit E3泛素蛋白連接酶dzip3抗體Cripto-1(C-rminus) 畸胎瘤衍化生長因子抗原(表皮生長因子相關(guān)肽)C端1 Kit 三酸腺苷依賴解旋酶DDX23抗體CSP (circumsporozoi proin/Plasmodium yoelii) 環(huán)子孢子蛋白(約氏瘧原蟲)抗原1 Kit 多能發(fā)育相關(guān)基因5抗體Calcitonin peptide 降鈣素抗原100 ul 三酸腺苷依賴解旋酶DDX3抗體CTBP1(C-rminal binding proin 1) C端結(jié)合蛋白1抗原1Kit |